lunes, 10 de octubre de 2011

CITOQUIMICA

CITOQUIMICA
 “APLICADA  A LA HEMATOLOGIA”

La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias.
MORFOLOGÍA <----->BIOQUÍMICA
  •  Son un complemento de las tinciones hematológicas.
  • Por medio de ellas se localizan enzimas y sustancias inorgánicas.
  • Así se mejora la diferenciación celular.
  • También sirven para el diagnóstico de ciertas leucemias.
CONFIABILIDAD DE LOS METODOS PARA EL Dx DE LAS LEUCEMIAS AGUDAS
CITOMORFOLOGIA -----> 70-80%
CITOQUIMICA.----->90-95%
INMUNOFENOTIPO
MICROSC. ELECTRN.----->99-100%
CITOGENETICA Y BIOL. MOLECULAR
Tres pasos fundamentales:
Fijación: preservar las estructuras y reactividad funcional de las células.

Incubación en el medio de reacción: como consecuencia se generan productos que ponen en evidencia el componente a ser estudiado.

Contraste: permite detectar con mayor facilidad el producto de reacción .

Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad
MUESTRAS UTILIZADAS
EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFÉRICA

PUNCION DE MÉDULA ÓSEA

PUNCION DE GANGLIOS

LCR


TIPOS DE  TINCIONES
Se pueden clasificar en:

Atendiendo al nivel de vitalidad de las células que se pretende colorear, se pueden dividir en vitales y no vitales.

Atendiendo al momento en el que empezaron a ser utilizadas para el Dx hematológico, se dividen en tradicionales y especiales.
TINCIONES  VITALES Y NO VITALES
Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre células que están vivas.

Las tinciones vitales son aquellas que se efectúan sobre células que están vivas, mediante la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. Son colorantes vitales: el verde Jano y el azul de metileno.

Las tinciones supravitales son aquellas que se realizan sobre células o tejidos vivos, pero que están aislados del organismo del que proceden.

Las tinciones no vitales se realizan sobre células muertas. La coloración de células muertas requiere un proceso previo de fijación, que tiene por objeto el mantener inalterada su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del portaobjetos.
TINCIONES  TRADICIONALES  Y ESPECIALES
Colorantes ácidos: tienen una especial afinidad por las estructuras alcalinas de las células, como por ejemplo la hemoglobina (eosina).

Colorantes básicos: tienen una especial afinidad por las estructuras ácidas de las células, como por ejemplo los ácidos nucleicos (azul de metileno).

Colorantes neutros: son sales de un ácido y de una base coloreados. Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro (eosinato de azul de metileno).

Colorantes indiferentes: son los que no tienen afinidad por estructuras ácidas o básicas. Son insolubles en el agua y tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante (Sudán III)
También hay combinaciones de colorantes que dan lugar a tinciones polícromas.

Una coloración es panóptica cuando se utilizan sucesivamente sustancias colorantes neutras.

Y es pancrómica cuando se aplican todas las sustancias colorantes neutras juntas.
Las reacciones citoquímicas pueden también clasificarse según el mecanismo
1-Progresivas estables: Son reacciones que exigen un tiempo mínimo pero no un máximo.

2-Progresivas indefinidas: En estas la reacción continúa y puede hacer ilegible el preparado o conducir a valores erróneos.

3-Fugaces: Son las que pierden color rápidamente y no pueden conservarse mucho tiempo.
CLASIFICACION DE LAS TÉCNICAS CITOQUÍMICAS
  • CITOQUÍMICA CLÁSICA
  • CITOQUÍMICA ELCTRÓNICA
  • CITOQUÍMICA FLUORESCENTE
  • INMUNOCITOQUÍMICA
    NO FLUORESCENTE
  • CITOQUÍMICA AUTOMATIZADA
 Citoquímica Clásica: Se fundamenta en reacciones coloreadas que pueden observarse e interpretarse con el microscopio óptico común.

Citoquímica electrónica: Se caracteriza por ser una metodología de elevada sensibilidad

Citoquímica Fluorescente: puede o no ser inmunocitoquímica, se fijan sobre distintas estructuras de las células y al ser excitadas por luz UV producen fluorescencias de distintos colores.

Inmunocitoquímica no fluorescente:Se basa en la marcación de anticuerpos con sustancias que son capaces de dar reacciones citoquímicas intensamente coloreadas que permiten su revelación.

Fisicocitoquímíca electroforética Permite reconocer determinados componentes de las organelas celulares obtenidas en solución mediante la lisis de la misma. Mediante electroforesis en un campo eléctrico y la identificación por reacciones citoquímicas, permite identificar complejos isoenzimáticos, mientras que los métodos citoquímicos simples revelan una enzima en bloque. 

Citoquímica automatizada: Es el fundamento de la CMF que utiliza la citoquímica fluorescente
CITOQUIMICA ELECTRONICA:
CITOQUIMICA FLUORESCENTE:
INMUNES
NO INMUNES
CITOQUIMICA CLASICA

Reconocimiento de principios no enzimáticos:
Hidratos de carbonos: PAS
Fe hemosiderínico: PERLS
Lípidos: Red Oíl/Sudan Black
Hemoglobina fetal: elución acida

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